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作者(中文):李志祥
作者(外文):Li, Chih-Hsiang
論文名稱(中文):含半胱胺酸胜肽鍵結雙亞硝基鐵化合物之合成與特性
論文名稱(外文):Synthesis and Characterization of Cysteine-containing Peptide-bound Dinitrosyl Iron Complexes (DNICs)
指導教授(中文):廖文峯
指導教授(外文):Liaw, Wen-Feng
學位類別:碩士
校院名稱:國立清華大學
系所名稱:化學系
學號:9723510
出版年(民國):99
畢業學年度:98
語文別:中文
論文頁數:70
中文關鍵詞:胜肽雙亞硝基鐵
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本研究是以固相胜肽合成法(SPPS),合成出兩段胜肽鏈[C3A](1)及[C4A](2) ([C3A]為KCAAACK、[C4A]為KCAAAACK;K=lysine, C=cysteine, A=alanine)。將化合物1或2分別和水溶性DNIC [Na-18-crown-6-ether] [Fe(SPh-NO2-COOH)2(NO)2](4)在pH 8.5 緩衝水溶液下反應,生成胜肽鍵DNIC [C3A](5)及[C4A](6),藉ESI-MS、EPR(298 K和77 K)、UV/VIS、IR(KBr)、XAS光譜可證實胜肽鍵DNICs的存在。
研究中可由ESI-MS得知胜肽鏈是以bidentate形式接上Fe(NO)2 core形成正一價胜肽鍵DNICs;77 K EPR和alkyl thiolate 配位小分子DNICs相同;但298 K EPR並非hyperfine splitting 光譜則和具相同配位環境小分子DNICs [H3O][Fe(Scys)2(NO)¬2]不同,且IR(KBr)之νNO、ΔνNO也和小分子DNICs不一樣,推測兩種結果皆因胜肽鏈大分子結構造成此差異現象。不同胜肽鍵DNICs都出現三組相似特殊UV/VIS吸收峰;藉pre-edge energy (Fe K-edge)落於7113.4~7113.8 eV範圍內之結果,更能明確指出有胜肽鍵DNICs生成。
最後總結所有光譜,也可以發現多一個alanine相隔cysteine用以增加胜肽鏈序列長度,並不會讓兩種胜肽鍵DNICs產生太大差異。
謝誌.................................................................................................................................i
摘要…………………………………………………………………………………...iii
Abstract……………………………………………………………………………….iv
目錄…………………………………………………………………………………....v
圖目錄………………………………………………………………………………..vii
表目錄…………………………………………………………………………….......ix
Scheme…………………………………………………………………………......…ix
第一章 緒論..........................................................................................................1
1-1 一氧化氮(nitric oxide)………………………………………………….1
1-2 一氧化氮在生物體內重要性…………………………………………3
1-3 一氧化氮在生物體的儲存與傳輸……………………………………7
1-4 蛋白質鍵結雙亞硝基鐵化合物(protein-bound DNICs)……………….8
1-5 小分子雙亞硝基鐵化合物(LMW-DNICs)…………………………10
1-6 胜肽鍵結雙亞硝基鐵化合物(peptide-bound DNICs)………………12
1-7 實驗研究方向…………………………………………………………15
第二章 實驗部分................................................................................................16
2-1 一般實驗.................................................................................................16
2-2 儀器.........................................................................................................16
2-3 藥品.........................................................................................................18
2-4 化合物的合成、鑑定與反應...................................................................20
2-4-1 胜肽鏈[C3A](1)及[C4A](2)之合成、純化與定量.........................20
2-4-2 [Na-18-crown-6-ether]2[Fe2(µ-S)2(NO)4] (RRS)(3)之合成............30
2-4-3 [Na-18-crown-6-ether][Fe(SPh-NO2-COOH)2(NO)2](4)之合成....31
2-4-4 pH = 5.0和pH = 8.5緩衝溶液之配製...........................................31
2-4-5 利用UV光譜定量胜肽鏈..............................................................32
2-4-6 合成胜肽鍵DNIC [C3A](5)和[C4A](6)........................................33
2-4-7 胜肽鍵DNIC [C3A](5)和[C4A](6)之光譜鑑定............................35
2-4-8 胜肽鍵DNIC [C3A](5)和[C4A](6)穩定性測試............................37
第三章 結果與討論............................................................................................38
3-1 Peptide的合成(胜肽鏈[C3A](1)、[C4A](2)).........................................38
3-2 胜肽鍵DNIC [C3A](5)和[C4A](6)之合成............................................40
3-3 胜肽鍵DNIC [C3A](5)和[C4A](6)之ESI-MS光譜鑑定....................41
3-4 胜肽鍵DNIC [C3A](5)和[C4A](6)之EPR光譜鑑定...........................44
3-5 胜肽鍵DNIC [C3A](5)和[C4A](6)之UV/VIS光譜鑑定.....................50
3-6 胜肽鍵DNIC [C3A](5)和[C4A](6)之IR光譜鑑定...............................52
3-7 胜肽鍵DNIC [C3A](5)和[C4A](6)之XAS光譜鑑定...........................59
3-8 胜肽鍵DNIC [C3A](5)和[C4A](6)穩定性測試....................................62
3-9 胜肽鍵DNIC [C3A](5)和[C4A](6)光譜整理.......................................64
第四章 結論........................................................................................................66
參考文獻......................................................................................................................68
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