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瓜類褪綠黃化病毒多元抗體之製備及其應用

台灣地處亞熱帶，氣候相當適合瓜類栽種，瓜類作物遂成為台灣重要的經濟作物之一。我國每年瓜類作物的栽種面積大約有23,000公頃以上，主要栽培區域以台南市、嘉義縣、雲林縣為主。病害是瓜類作物生長的限制因子之一，其中包括病毒、細菌及真菌等所引起之病害。2009年在雲林地區發現大量瓜類作物出現黃化現象，經研究發現與2004年發生於日本的瓜類褪綠黃化病毒（Cucurbit chlorotic yellows virus, CCYV）所引起的病害相同，此病毒病害已造成瓜類作物嚴重危害。選殖CCYV病毒鞘蛋白（coat protein, CP）基因以供製造抗血清之用。根據選殖株pGEMT-CP/DH5α基因定序之結果得知鞘蛋白基因之核酸長度為735 bp，此基因轉譯成蛋白質時可產生245個胺基酸且其分子量為28 kDa。為大量生產鞘蛋白，將鞘蛋白基因重組至選殖株pQE31-CP/M15中，蛋白質表現分析證實此選殖株可在pQE系統中穩定表現，經大量純化後也成功製造出鞘蛋白之抗血清，可實際應用於CCYV之免疫磁珠檢測分析。

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番茄斑點萎凋病毒（＂Tomato spotted wilt virus＂）核鞘蛋白抗血清製備及其血清學親緣關係之探討

番茄斑萎病毒屬（＂Tospovirus＂）隸屬於布尼亞病毒科（＂Bunyaviridae＂），病毒顆粒呈球型具外套膜（envelope），其內含三條單股RNA片段，依大小稱之為L、M及S RNA，由薊馬類（thrips）昆蟲以永續性方式傳播，核鞘蛋白（nucleocapsid protein, NP）序列的同源性與血清學親緣關係，為該類病毒分類之重要依據。番茄斑點萎凋病毒（＂Tomato spotted wilt virus＂, TSWV）是＂Tospovirus＂屬的代表種（type species），寄主範圍廣，且在全世界造成嚴重的危害，在台灣亦有危害甜椒及彩色海芋等作物的記錄。為了落實防檢疫工作，本研究以細菌表現系統生產TSWV之NP做為抗原，用以製備抗血清，命名為RAs-TSWV-NP。經間接酵素連結免疫吸附分析法（indirect enzyme-linked immunosorbent assay, indirect ELISA）與西方墨點轉漬法（western blotting）分析RAs-TSWV-NP和16種tospoviruses之反應，可得知 RAs-TSWV-NP除了與TSWV反應外，亦與花生輪斑病毒（＂Groundnut ringspot virus＂, GRSV）、番茄黃化斑點病毒（＂Tomato chlorotic spot virus＂, TCSV）、水仙百合壞疽條斑病毒（Alstroemeria necrotic streak virus, ANSV）、菊花莖部壞疽病毒（Chrysanthemum stem necrosis virus, CSNV）、以及鳳仙花壞疽斑點病毒（＂Impatiens necrotic spot virus＂, INSV）產生血清反應。親緣演化分析顯示TSWV、GRSV、TCSV、ANSV、CSNV及INSV屬於同一演化分支（clade）。關於TSWV、GRSV、TCSV和ANSV之間的血清學關係雖早已於先前的文獻中報導，然而本研究結果更進一步指出TSWV與CSNV及INSV之間亦可能存在著血清學親緣關係，此結果與親緣演化分析符合。親緣關係的釐清將有助於＂Tospovirus＂屬病毒的診斷與鑑定。