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六十種中藥材熱水萃出物對痤瘡病原菌之抑菌性

Propionibacterium acne、Staphylococcus aureus與Staphylococcus epidermidis為痤瘡病灶中之常見菌株，本研究係針對六十種中藥材之熱水萃出物，進行此三株菌株之抑菌性試驗。由disc diffusion assay 篩選出五倍子、黃芩與黃柏對於P. acne BCRC10723、S. aureus BCRC10451與S. epidermidis BCRC10823有顯著之抑菌效果。五倍子、黃芩與黃柏之熱水萃出物對 P. acne BCRC10723之最小抑菌濃度(minimum inhibitory concentration, MIC)分別為0.3125 mg/ml、0.3125 mg/ml與0.625 mg/ml；對S. aureus BCRC10451之MIC分別為0.625 mg/ml、0.625 mg/ml與2.5 mg/ml；對S. epidermidis BCRC10783之MIC則分別為 0.3125mg/ml、0.625 mg/ml與2.5 mg/ml。五倍子、黃芩與黃柏之熱水萃出物經由n-hexane、ethyl acetate、diethyl ether與1-butanol加以區分後，可初步分離出五倍子之抑菌成分位於ethyl acetate區分，黃芩與黃柏之抑菌成分則於1-butanol區分。

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乳酸菌的活性對於其在Caco-2與HT-29細胞株黏附的影響

部分文獻指出，死去的益生菌依然可以黏附在組織培養的細胞上，這似乎暗示了存活、活體並非益生菌黏附作用所必須。另項研究觀察Lactobacillus GG與L. rhamnosus LC-705經過熱與酸的處理後，可提高其對黃麴毒素的結合能力，其他像UV光照、醇、鹼等處理皆無法影響其結合能力，這代表了結合能力的消長原因可能是因為細胞壁外層結構改變，而非菌種的生長能力改變。近期藉由原子力顯微鏡的測試觀察結果顯示：乳酸菌的黏附能力與其細胞壁表層結構成分有密切關係。 本研究培養幾種黏附力強弱程度不同的乳酸菌，觀察其在正常生長狀態下、自然失去生長能力狀態下(因營養條件不足，導致失去生長能力的菌體，將細胞壁外層結構可能變化的機率降至最低)以及非接觸性外力介入失去生長能力狀態下(UV照射24小時後的菌體，破壞其代謝功能而不影響細胞壁外層結構)的黏附力。比較結果發現不同的生長能力狀態下，各種受測乳酸菌對於相同的細胞組織(Caco-2或HT-29)之黏附力並沒有非常顯著的差別，而對不同的細胞組織(Caco-2與HT-29)之黏附力仍有類似的趨勢可比對，而且連菌體破片也依然保持類似於完整菌體的黏附密度。由此種種說明了不同種類乳酸菌的黏附能力與其活性無關，只與其細胞壁表層結構成份有關，並確認乳酸菌的存活並非是腸道黏附的重要因子。

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冷光蛋白質微陣列平台技術之研究

蛋白質微陣列已成為蛋白質體學研究中的重要工具。蛋白質微陣列的優勢在於可同時進行大量分析，但所需成本較高，故降低成本有其必要性。 本研究目的在於發展一低成本之冷光蛋白質微陣列之技術平台。以MicroCaster arrayer手動式打點機，將anti-human interleukin-2 polyclonal antibody及anti-human interleukin-4 polyclonal antibody點製於nitrocellulose membrane，以標定horseradish peroxidase的streptavidin結合帶有biotinylated anti-human interleukin-2及biotinylated anti-human interleukin-4 monoclonal antibody應用類似sandwich type之enzyme-linked immunosorbent assay反應，以偵測recombinant human interleukin-2及recombinant human interleukin-4。使用horseradish peroxidase產生之chemiluminescence以charge-coupled device拍攝，藉 由ScanAlyze軟體分析。 本技術平台以冷光基質反應產生chemiluminescence，由於產生發光 之反應中間物會向外擴散，故本系統最高點製密度為192點。本系統反 應條件確立後，recombinant human interleukin-4與recombinant human interleukin-2偵測極限分別為0.125 ng/ml和0.5 ng/ml，檢量線跨越2個 級數。 由於蛋白質微陣列缺乏類似polymerase chain reaction的反應提高靈敏度，故應用streptavidin-peroxidase polymer與streptavidin-biotin complex兩種方式，藉由提高反應訊號，以求更低的偵測極限。結果顯示雖然有 使蛋白質微陣列之偵測信號增加，但未降低偵測極限。

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生物可分解聚酯與澱粉於混煉製備與加工性能之研究

本研究主要是分作三部份實驗，第一部份實驗是利用設計之熱塑性澱粉配方（含澱粉、甘油、水、卵磷脂與酵素），探討四種不同澱粉/澱粉+聚酯比（S/S+E ratio）於30％、40％、50％與60％的擠壓原料之機械性質、成本與熱性質分析，以選擇可以進行塑膠袋吹膜之配方。實驗結果顯示，S/(S+E)比在40％左右的抗張強度（Tensile strength）可達7.6MPa。而伸長率部份（Elongation），當S/S+E比為30％，其伸長率＞667％，當S/S+E比為40％，其伸長率為588％，當S/S+E比為50％，其伸長率為418％，當S/S+E比為60％，其伸長率為134％，四組配方之伸長率皆有不錯的表現。所以，本實驗選擇以S/S+E比在40％的配方（成本相當低，約USD 2.34/kg）所生產的樣品進行吹膜。在吹膜前測其玻璃轉移溫度（Tg）約為47℃，熔點（Tm）約為127℃。吹膜成品經封口與裁剪之後，已具備生物可分解背心袋之雛形。 第二部份的實驗是利用2^(4-1)部份複因子實驗設計法，以尋求S/S+E比在50％或60％等較低成本的配方，其機械強度改善之可能性。實驗結果顯示，S/S+E比在50％與60％的配方中，伸長率還是相當的優異，最好的結果為517％，不過在抗張強度部份，最好的結果是6.05MPa，尚有待加強。 第三部份的實驗是利用三變數五層級的反應曲面法，尋求S/S+E比在40％抗張強度之最佳配方。實驗結果顯示，此次反應曲面法各成份的添加比例設計範圍不夠寬廣，所以多數配方沒有明顯效應。不過在反應曲面法20組的實驗配方中，可達到不錯的抗張強度（9.14MPa）與伸長率（898％），且其每公斤成本只有約2.39美元。

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十二種中草藥抗氧化能力分析

本研究以12種自古流傳的中草藥作為本次研究的目標，希望能找出具有抗氧化功能的效果。除了使用一般常見的抗氧化檢驗方法：螯合亞鐵離子、還原力、清除DPPH自由基能力外，增加最新檢測數種自由基的方法：超微弱化學冷光法，進一步的分辨出各種中草藥在抗氧化作用上的不同功效。 經過六種抗氧化實驗的測定，驗證這12種中草藥都具有抗氧化的能力。所有的樣品中抗氧化效果最好的是仙草，其次是蓮葉、丹蔘、蓮子芯、薑黃。不論是螯合亞鐵離子、還原力、清除DPPH自由基、Superoxide anion、 Hydroxyl radical及 Peroxyl radical都有不錯的效果。而麥門冬與西紅花，在還原力、清除DPPH 、Superoxide anion、Peroxyl radical、Hydroxyl radical的效果並不好，甚至無螯合亞鐵離子及清除Peroxyl radical的能力。且經過高效能液相層進行成分分析，發現抗氧化效果效優的中草藥樣品，也都明顯地出現波峰。

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天然璋芝與液態培養璋芝成分之萃取與分析

樟芝是最近非常熱門的一種只生長於台灣的植物，根據最近一連串的研究顯示它有非常高的保健及藥用價值，但是因為其成分非常複雜，一直到現在還無法確定到底它包含多少種成分，又由於其生長不易，所以目前市面上所販售的產品大多是發酵而來，到底其與真正野生的差異如何？再者要如何以HPLC選擇適當的移動相來進行分析，這即是本實驗的目的。 我們根據中華藥典之標準方法進行以70 % 乙醇萃取，又以C18 reverse phase層析管柱進行120分鐘之分析，以求取能儘量完整呈現野生樟芝之層析圖，再針對台灣花蓮、台東、阿里山、等三地野生樟芝進行分析，發現其層析圖譜幾乎一模一樣，相似度非常高。另外我們也嘗試以指紋圖譜波長之方式（210nm、230nm、254nm、280nm）找出最適合分析之波長為254nm，加入的移動相酸源為0.1%的醋酸。在此條件下可分離出最多之成分。 此外野生樟芝乙醇萃取物在波長450nm以下皆有很強之吸收，而人工發酵產品則在400nm以下才有較強的吸收，所以如果要用光譜儀找出簡單之區分方法，此一方法不失為一簡便的區分方法。

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不同培養基與誘導劑濃度對基因重組半胱氨酸蛋白酶抑制劑之活性表現的影響

芋頭中的半胱氨酸蛋白酶抑制劑（Cystatin）具有抗線蟲或鱗翅目昆蟲之功能。本研究以基因重組Escherichia coli XL1-blue/pGEX-CeCPI於搖瓶培養中生產半胱氨酸蛋白酶抑制劑（Cystatin）。探討Cystatin生產時，應根據何種原則添加誘導劑Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside (IPTG)。因尚無文獻報導 Cystatin 之抑制活性的簡易測量方法，而本實驗則發展了一種測量 Cystatin 抑制比活性的簡易方法。在實驗中發現，添加0.2 mM IPTG進行誘導時，不論以Luria Broth （LB） 或是Expansion Broth/Overexpression Broth （EB/OB）為培養基，Cystatin 的產量能夠於12小時達到最高，以EB/OB為培養基生產之Cystatin 抑制比活性最高值是以 LB 為培養基的1.33倍。若以0.2 mM IPTG 進行誘導，以有無加入甘油當抗凍劑進行保存破菌後的蛋白質萃取液做比較時，當未加入甘油，以EB/OB為培養基生產之 Cystatin 抑制比活性最高值是以LB為培養基的3.58倍。若保存時加入甘油，以LB為培養基生產之 Cystatin 抑制比活性，其最高值是未加甘油組的1.55倍，以 EB/OB 為培養基生產之 Cystatin 抑制比活性，其最高值是未加甘油組的1.47倍。

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含sporamin可分解天然生物驅蟲劑之 噴霧技術的研究

本研究以噴霧乾燥機將甘藷榨汁中具有胰蛋白抑制劑活性與驅蟲效用的sporamin製成具有生物農藥功能的粉劑。實驗中發現以不同重量百分比的澱粉糊精(dextrin)與甘藷液混合噴霧後，胰蛋白抑制比活性(U/mg protein) 活性量隨dextrin添加量增加而無明顯差異，所以証明噴霧乾燥不會影響比活性

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用酵母菌Pichia holstii醱酵生產胞外多醣的最適化

硫化寡醣在臨床上具有抗凝血、抗病毒以及抗腫瘤的潛力。酵母菌的細胞外多醣可以當作硫化寡醣的原料，因而受到格外的重視。本研究主要是利用酵母菌Pichia holstii BCRC 22637，於五公升醱酵槽中，在不同培養基的條件下，探討產生細胞外多醣的最適化。醱酵條件包括：不同葡萄糖濃度、磷酸鉀濃度與不同氮源的濃度，以得到生產細胞外多醣的最大產量。醱酵槽操作條件為轉速450 rpm，通氣量2 L min-1，溫度維持在25℃，pH控制在5.0 ± 0.3之間。經過醱酵120小時後，發現培養基中葡萄糖的濃度為200 g L1 ；磷酸鉀濃度為15 g L1以及corn steep liquor 4 g L-1 和yeast extract 4 g L-1時，細胞外多醣的乾重高達72.4 g L1，而菌體量乾重達20.7 g L1。

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Rhodosporidium toruloides D型胺基酸氧化酵素基因在大腸桿菌中之表現

D-型氨基酸氧化酵素( D-amino acid oxidase )為製造頭胞菌素類抗生素C (cephalosporins)之先驅物7-aminocephalosporanic acid (7-ACA)的重要酵素。以四種不同的表現載體pET23am、pET24am、pET20b和pET26b、兩種培養液LB和TB以及不同濃度誘導劑使Rhodospridum toruloides DAO cDNA基因於Escherichia coli strain BL-21(DE3)異源表現。以LB培養時，當pET23am為表現質體，誘導後3小時可測得胞內DAO最高活性4294 U/l;以pET24am為表現載體時，誘導後約5小時可測得最高胞內DAO活性為2724 U/l;以pET20b和pET26b為表現載體時，活性高峰出現在誘導後2小時，DAO活性分別為571和592 U/l。當培養液置換成TB時，DAO活性可提升5〜10倍。pET23am和pET24am為表現質體時，誘導後18小時有較高DAO胞內活性，分別為50592和39651 U/l;pET20b為表現質體時，誘導後5小時有較高DAO活性3241 U/l;pET26b為表現質體時，在誘導後8小時有較高胞內活性2393 U/l。