Transient Receptor Potential Vanilloid Subtypei1 (TRPV1) Expression in Bone Marrow-derived Stromal Cells of Rats in vitro

辣椒素在體外對鼠骨髓衍生基質細胞(BMSCs)之暫時潛在性辣椒素接受體次型1(Subtypel, TRPV1)的活化作用

岩井康智(Yasutomo Iwai) ； 黃純德(Shun-Te Huang) ； 岩井理惠(Rie Iwai) ； 中塚美智子(Michiko Nakatsuka) ； 嚴雅音(Yea-Yin Yen) ； 牧田敬子(Keiko Makita) ； 森田章介(Shosuke Morita) ； 隈部俊二(Shunji Kumabe) ； 黃宏智(Huang-Chih Huang)

《Taiwan Journal of Oral Medicine Sciences》 25卷1期 (2009/04) Pp. 4-22

https://doi.org/10.7059/TJOMS.200904.0004

摘要

目的：許多不同形態的刺激被發現可在體外引發骨髓基質細胞(BMSCs)的增殖，分化，轉化或組織形成。然而，微小培養環境中的干擾因子限制了細胞增殖，並且導致了培養細胞的死亡。TRPV1是一個非選擇性配位體閘門陽離子通道，可被辣椒素、43℃以上、酸性環境和外在或內生性刺激所活化。當下研究的目的著基於在體外含辣椒素的培養基中，骨髓基質細胞的組織學變化和轉化率(turnover)。
材料及方法：我們研討wistar鼠股骨骨髓基質細胞在體外含辣椒素培養基中的轉化率及培養基微小環境隨之的變化。含添加物培養基中骨髓基質細胞的增殖，分化和以RT-PCR檢測TRPV1作用下產生mRNA的量及含添加物培養基中酸鹼值變化和鈣離子量皆給予檢視，在獲得這些數據後，予以統計分析。
結果：骨髓基質細胞的增殖隨培養天數而變化，在第十天，鹼性與37℃培養基環境下達到最高點。在實驗設計的培養天數，含不同添加物的培養基中，各培養基裡的骨髓基質細胞繁殖情況無顯著差異，而第十天是受培養細胞繁殖的轉折點。結果並顯示出，在第十四天時，與其他培養基比較，間隔添加25μm辣椒素的培養基中的骨髓基質細胞增殖量最小。而對於TRPV1用下產生的mRNA所使用的TR-PCR檢測法亦顯示出在單次或間隔（3天）添加25μm辣椒素後，於第三天及第七天可測出這種mRNA的出現。
結論：當下的研究顯示出，在體外試驗中，間隔添加物25μm辣椒素於培養基中，可使對辣椒素敏感的骨髓基質細胞TRPV1顯著的被活化，並媒介鈣離子匯流入細胞，最後導致細胞死亡。而TRPV1的管道在第七天及第＋天時去敏感化。

並列摘要

We studied rat femur bone marrow stroma cells (BMSCs) and microenvironment turnover in capsaicin (CAP)-conditioned media in vitro. Proliferation, differentiation and TRPV1 expression at the mRNA level (RT-PCR) of conditioned BMSCs, and pH changes and calcium assay of the conditioned culture media were examined; the obtained data were statistically analyzed. Elapsed time-dependent cell proliferation of BMSCs peaking at day 10 was observed in alkaline phase and 37℃ microenvironment. Although there were no significant differences of proliferation in different conditions on designated experimental days, day 10 was the turning point of proliferation phase where intermittent administration of 25µm CAP resulted in the least amount of cell proliferation than other culture conditions on day 14. The present RT-PCR study revealed expression of TRPV1 mRNA during 3 to 4 days (either day 3 or day 7) after single or intermittent exposure under 25µM CAP. This study elucidated that by intermittent addition of 25µM CAP into the culture medium, the CAP-sensing TRPV1 of the rat BMSCs was activated to significantly mediate Ca (superscript 2+) influx leading to cell death, and the TRPV1 was desensitized, between day 7 and day 10 in vitro.

並列關鍵字

TRPV1 ； Stromal Cell ； Bone Marrow ； Rat