使用專一性引子（primer）檢測糞便檢體的困難梭狀桿菌並分析其Ribotype

王敦仁 ； 張富傑

《台灣醫檢雜誌》 33卷3期 (2018/09) Pp. 1-6

摘要

困難梭狀桿菌(Clostridium difficile)為具有胞子(spore)且絕對厭氧的革蘭氏陽性桿菌，正常情況下，該細菌並不會造成任何疾病或症狀，但是一旦使用了抗生素之後，腸胃道的其他細菌被抗生素抑制，且啟動了該菌株的Tcd基因叢(cluster)後，困難梭狀桿菌就會製造出毒素，進而造成拉肚子或是偽膜性腸炎之臨床症狀。目前我國分析困難梭狀桿菌ribotype的方法是先將困難梭狀桿菌培養出來，再透過DNA萃取後，進行PCR與定序，最後知道此困難梭狀桿菌是屬於何種ribotype。根據研究，我國現行流行的困難梭狀桿菌菌株的ribotype以017、078與126為主。然而，是否可以直接從糞便檢體中快速分析ribotype以提供臨床醫師診斷參考，將會是本篇研究的重點。本實驗收集了148病人的糞便檢體，這些病人都被懷疑是因為使用了抗生素而造成的腹瀉。首先先進行GDH(Glutamate Dehydrogenase)檢驗，收集檢驗陽性的檢體後進行DNA萃取、PCR與定序，最後再將定序的結果做分析。本篇研究，在148個病人的檢體中，有53個陽性檢體，再透過DNA萃取後，進行PCR實驗。實驗後只有46個檢體的PCR結果為陽性，而此46株困難梭狀桿菌的ribotype 分別為42株ribotype 017、3株ribotype078與1株其他。目前在北台灣可能的困難梭狀桿菌之ribotype以ribotype 017為主，根據過往的研究結果顯示，困難梭狀桿菌ribotype 017的毒力因子大多為毒力性A-B+，再過往的報導中，也顯少有困難梭狀桿菌毒力性A-B+/ ribotype 017菌株造成偽膜性腸炎。此外，53個GDH檢驗結果為陽性的糞便檢體中，只有46個可以檢驗到困難梭狀桿菌的16sRNA~23sRNA，推測可能的原因可能與糞便的DNA萃取有關。