草蝦alpha-2 macroglobulin基因啟動子的選殖與分析

Cloning and Analysis of the Alpha-2 Macroglobulin Promoter of the Black Tiger Shrimp (Penaeus monodon)

戴恩聖(En-Sheng Dai)

指導教授 ： 蔡懷楨

國立臺灣大學/生命科學院/分子與細胞生物學研究所/碩士(2005年)

https://doi.org/10.6342/NTU.2005.10305

摘要

alpha-2 macroglobulin在對蝦為一血淋巴球專一性且具免疫可誘導性表現的基因，本實驗中由草蝦血球萃取genomic DNA，並建立一嵌入片段長度範圍約11.5 kb至14.5 kb，平均長度約13 kb的genomic DNA library (1×108 pfu/ml)。利用extender PCR及library screening的方式分別獲得在轉譯起始位前535 bp和1.2 kb的alpha-2 macroglobulin DNA片段；將此兩DNA片段構築在EGFP綠螢光報導基因後進行斑馬魚卵顯微注射，結果顯示兩DNA片段皆可驅動EGFP綠螢光報導基因在斑馬魚表現，表現率分別為30%和40%(n=300)，在螢光表現率上1.2 kb片段表現能力較535 bp片段高出約10%；而在表現綠螢光的個體中，兩不同長度的片段均有70%為專一性強表現在肌肉束上。利用果蠅類巨噬細胞Schneider 2 (S2)細胞株進行轉染實驗，此兩DNA片段皆可驅動EGFP及firefly luciferase報導基因的表現；而在luciferase活性測試上，若以未含有啟動子的pGL3-basic empty vector為基礎比較，535 bp片段和1.2 kb片段表現能力分別為110倍(SD=16.3)和150倍(SD=18.0)。由上述斑馬魚螢光表現率和S2細胞luciferase活性測試，可推測1.2 kb的片段中可能包含有535 bp片段所沒有的cis-element來加強基因的表現。藉由斑馬魚系統和果蠅S2細胞株的實驗，可以證明草蝦A2M基因轉譯起始位前1.2 kb的DNA片段為一具有驅動基因強表現的DNA片段。

關鍵字

A2M基因 ； 對蝦 ； (S2)細胞株 ； 斑馬魚

並列摘要

無資料

並列關鍵字

alpha-2 macroglobulin ； genomic DNA library ； luciferase

參考文獻

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