Der p 2和IL-6影響呼吸道上皮細胞機制之研究

呼吸道上皮細胞為呼吸道對抗過敏原、細菌與病毒等外在病原的第一道屏障。呼吸道上皮細胞間會透過形成緊密連接(tight junction, TJs)的方式將細胞與細胞之間的空隙填補起來，以維持呼吸道屏障的完整性。塵螨已知為室內吸入性過敏原的主要來源之一，塵螨的過敏原目前所發現的約二十幾群，其中第一群和第二群的為主要過敏原。過去研究中發現第一群塵螨過敏原可以透過其蛋白酶活性對緊密連接的蛋白進行破壞，影響緊密連接的形成，進一步破壞呼吸道上皮細胞的完整性。然而目前第二群塵螨過敏原對於緊密連接的影響仍未知，因此我們想要探討第二群塵螨過敏原對構成緊密連接的主要組成分子之影響。我們首先以大腸桿菌表現塵螨過敏原重組蛋白Glutathione S-transferase (GST)-Der p 2，並以親和性管柱加以純化。進一步的實驗發現GST-Der p 2不會影響人類肺癌細胞株A549的細胞週期，但卻會影響緊密連接的主要組成分子Claudin-2和ZO-1的mRNA表現。Der p 2會活化第4型類鐸受體 (Toll-likes receptors, TLR4)並造成免疫系統的活化，有趣的是我們發現單純以TLR4的活化物脂多醣(lipopolysaccharide, LPS)處理A549細胞並不會影響Claudin-2的表現，顯示Der p 2並非透過TLR4來影響Claudin-2的表現。Der p 2也會誘導Claudin-2的蛋白表現，並且使細胞膜上的Claudin-2增多。beta-catenin為調控Claudin-2啟動子的轉錄因子，我們也發現Der p 2會增加beta-catenin的表現量，並且促使其轉位至細胞核中。除此之外，Der p 2會透過誘導AKT的磷酸化而增加beta-catenin上游GSK3-beta的磷酸化，並使其失去活性。加入phosphatidyl inositol 3-kinase (PI3K)的抑制劑wortamannin則會影響Der p 2誘導Claudin-2表現的能力。這些證據顯示Der p 2會透過PI3K/AKT的路徑，增加GSK3-beta的磷酸化並使其失去活性，促使beta-catenin轉位至細胞核中，進一步誘導Claudin-2的mRNA以及蛋白質的表現。

關鍵字

塵螨氣喘；呼吸道上皮細胞

並列摘要

Non-proteolytic group 2 allergen, Der p 2 (DP2) is known as a major allergen derived from house dust mite Dermatophagoides pteronyssinus. Paracellular epithelial barrier, being composed of a number of tight junction (TJ) molecules, plays pivotal roles in resistance of pathogen invading. However, whether DP2 affects epithelial TJ molecules is unclear. Therefore, we aimed to investigate the effects of DP2 on epithelial TJ molecules, and the mechanism by which expression of junction molecules is regulated by DP2. Cell cycle and mRNA expression of TJ proteins of lung alveolar cell A549 were analyzed by RT-PCR and flow cytometry. Level of Claudin-2, subcellular distribution of

並列關鍵字

dust mite ； asthma ； airway epithelial cell

參考文獻

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