以BelloCell®生產並結合膠體過濾層析純化法製作可做為疫苗使用的重組桿狀病毒

Production and Purification of Baculovirus as a Vaccine by BelloCell® Reactor and Size Exclusion Chromatography

張文愷(Wen-Kai Chang)

指導教授 ： 胡育誠

國立清華大學/工學院/化學工程學系/碩士(2009年)

摘要

家禽流行性感冒病毒對世界家禽產業造成難以估計的經濟損失，而其所衍生出的鳥傳人，豬傳人，及人傳人的變種，其高至死率使我們迫切的需要發展疫苗以控制疫情。Bac-HA64為一表面帶有禽流感病毒套膜(envelope)的血球凝集素(Hemagglutinin, HA)蛋白於桿狀病毒套膜上之偽型桿狀病毒，並已在本實驗室先前的動物實驗中初步證實其具有引發中和血球凝集素抗體之效用。因此我們希望在疫苗應用上發展一套便利的製程來大量生產及純化此偽型桿狀病毒Bac-HA 64。在量產方面，我們結合國內賽宇細胞科技公司所開發出的新式拋棄式填充床反應器BelloCellÒ，可有效大量培養細胞，且具有低剪應力之優點，預期可減低桿狀病毒在生產過程之傷害，所以我們將其用來生產桿狀病毒。首先我們在篩選Sf 900 II、TNM、ESF 921三種培養基後，發現Sf 900 II可產出最高之病毒效價，此外BelloCellÒ相較於旋轉瓶，在產Bac-HA64上雖無明顯提升，但生產Bac-CHA時，效價則有近三倍之提升。在純化方面，先前實驗室已成功建立利用切向流過濾（tangential flow filtration, TFF）用以濃縮並將病毒環境溶液置換為緩衝液，我們在此將再結合膠體過濾層析法來純化桿狀病毒。TFF是個很省時且易於製程放大的超過濾系統，除了濃縮外，尚可以移除部份較小的雜蛋白，回收率約在65%；而膠體過濾層析純化法是利用分子大小不同，造成通過管柱時間不同來分離其他雜質，回收率約在65.5 %，耗時約50 min。整個純化流程回收率達42.2 %，純度方面達到70%以上。本實驗中所建立的生產程序，在效價上有著跟傳統的旋轉瓶一樣甚至更好的效果，但卻是種非常容易放大製程的生產方式。純化程序回收率遠比傳統的超高速離心(<1%)來得高，且是種非常省時且容易大量的純化程序。

關鍵字

膠體過濾層析 ； 反應器 ； 桿狀病毒 ； 流感疫苗 ； 切向流過濾

並列摘要

無資料

並列關鍵字

BelloCell ； reactor ； baculovirus ； influenza vaccine ； tangential flow filtration ； size exclusion chromatography

參考文獻

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