位向抗體修飾及細胞偵測之應用

Oriented Immobilization of Antibodies and It's Application on Cell Detection

徐瑋玲(HASH(0x1b307000))

指導教授 ： 何佳安

國立清華大學/理學院/化學系/碩士(2008年)

摘要

在固相基材上修飾上抗體的方法已被應用在許多領域上，例如純化蛋白質、診斷型免疫檢驗、以及生化感測器；然而過去的文獻指出在修飾或固定抗體的過程中常伴隨抗體生物活性的損失。活性損失的主要原因是抗體在固相基材上隨機固定化造成位向不良的結果，也因而降低抗體辨識抗原的效率。因此本研究的目的是將抗體位向修飾在網版印刷電極表面，並且以包裹電化學活性物質的微脂球作為訊號來源為基礎，偵測目標分子，並發展新型生化感測器。
本論文研究共分成兩部分，第一部分以生物素為分析樣品，研發網版印刷電極上抗體的位向修飾方法，期許藉此由較好的位向之調整，使感測器擁有更好的偵測靈敏度。本研究中共研發兩種位向修飾方法：第一套系統為 half-Ab/AuNP/SPE 系統，利用弱還原試劑還原抗體重鏈之間的雙硫鍵，形成對半抗體（half-antibody, half-Ab）。Half-Ab 接著與電極表面上經由電鍍自組裝形成的金奈米粒子反應，藉由硫金鍵將抗體修飾在電極上；此法的偵測極限為 20.5 pg。第二套系統為 Ab/APBA/SPE 系統；此系統是將 aminophenyl boronic acid（APBA）修飾在電極表面上，然後藉由 boronic acid 與抗體（antibody, Ab）CH2 domain 的醣基反應，將抗體修飾在電極表面上。此系統的偵測極限可下降為 0.19 pg。
第二部分則是由第一部分延伸而來，希望藉由 APBA 與 K562 細胞表面的醣基反應，藉此將細胞固定在電極表面上；再以表面修飾有anti-P-gp antibody 的微脂球偵測細胞表面的 P-glycoprotein（P-gp）。由於此細胞株在脂溶性抗癌藥物（doxorubicin, dox）刺激下將過度表現 P-gp，並啟動多重抗藥性，將藥物運輸至胞外，以減少藥物在胞內的累積。而對於系列不同濃度之 P-gp 標準液，APBA/SPE 系統可達到0.815 ng 之偵測極限。此外 APBA/SPE 系統可以明顯地偵測出受到 dox 刺激的 K-562 細胞（K-562/dox）的確有較高的 P-gp 分子的表現量。

關鍵字

抗體修飾 ； 網版印刷電極 ； K-562細胞

並列摘要

無資料

並列關鍵字

HASH(0x1b30bda0) ； HASH(0x1b30be40) ； HASH(0x1b30bee0)

參考文獻

[1] A. D. Bangham, M. M. Standish, G. Weissmann, The action of steroids and streptolysin S on the permeability of phospholipid structures to cations, J. Mol. Biol. 1965, 13, 253.

[3] J. P. Oconnell, R. L. Campbell, B. M. Fleming, T. J. Mercolino, M. D. Johnson, D. A. McLaurin, A highly sensitive immunoassay system involving antibody-coated tubes and liposome-entrapped dye, Clin. Chem. 1985, 31, 1424.

[4] Olson F, Hunt C. A., Szoka F. C., Vail W. J., P. D., Preparation of liposomes of defined size distribution by extrusion through polycarbonate membranes, Biochim. Biophys. Acta-Biomembr. 1979, 557, 9.

[5] D. Papahadjopoulos, N. Miller, Phospholipid model membranes. I. Structural characteristics of hydrated liquid crystals, Biochim. Biophys. Acta-Biomembr. 1967, 135, 624.

[6] F. Szoka, D. Papahadjopoulos, Procedure for preparation of liposomes with large internal aqueous space and high capture by reverse-phase evaporation, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1978, 75, 4194.