以桿狀病毒/昆蟲細胞表現系統生產豬用二價疫苗

Development of Bivalent Vaccines against Swine Diseases using Baculovirus/Insect Cells Expression System

林伶俐

指導教授 ： 胡育誠

國立清華大學/工學院/化學工程學系/碩士(2014年)

摘要

豬環狀病毒相關疾病、豬瘟、豬生殖與呼吸綜合症皆為病毒感染所引發的豬隻重要疾病，存在於全世界各國家的豬群中，每當爆發大流行皆造成養殖業的重大經濟損失，而施打對應疫苗為最有效的防疫策略，因此我們希望針對這些病毒發展品質高且成本低的疫苗，提供豬隻抵抗病毒感染的免疫力。先前實驗室已成功利用昆蟲細胞/桿狀病毒表現系統大量生產豬環狀病毒的外殼蛋白(Cap protein)做為疫苗抗原，並且經由豬隻動物實驗證實能夠誘發豬隻對豬環狀病毒的免疫力。後續我們也藉由去除天然的核停留訊號使Cap蛋白不會累積於細胞核中限制產量及增加純化困難，然而進一步藉由加入額外的胞外分泌訊號仍舊無法使Cap蛋白由細胞質分泌至胞外，藉由共同感染帶有功能性蛋白Vankyrin以及Heat Shock Protein基因的重組桿狀病毒，也無法增加Cap蛋白產量及提升溶解度。研究過程中我們也觀察到去除核停留訊號的Cap蛋白結構不穩定，有蛋白質容易降解的情形，為了解決以上的問題，我們設計新的重組桿狀病毒建構，將具有分泌訊號的豬瘟病毒以及豬生殖與呼吸綜合症病毒的結構蛋白融合於Cap蛋白的N端成為分泌型融合蛋白，成功的改變Cap蛋白在細胞內的分布位置，且此融合蛋白含有兩個病毒抗原，因此具有發展為二價疫苗的潛力。

關鍵字

第二型豬環狀病毒 ； 二價疫苗 ； 重組桿狀病毒/昆蟲細胞表現系統

參考文獻

Allan G, Krakowka S, Ellis J, Charreyre C. 2012. Discovery and evolving history of two genetically related but phenotypically different viruses, porcine circoviruses 1 and 2. Virus Res 164:4-9.

Allan GM, Phenix KV, Todd D, McNulty MS. 1994. Some biological and physico-chemical properties of porcine circovirus. Zentralbl Veterinarmed B 41:17-26.

Alonso C, Davies PR, Polson DD, Dee SA, Lazarus WF. 2013. Financial implications of installing air filtration systems to prevent PRRSV infection in large sow herds. Prev Vet Med 111:268-277.

Andrew ME, Morrissy CJ, Lenghaus C, Oke PG, Sproat KW, Hodgson AL, Johnson MA, Coupar BE. 2000. Protection of pigs against classical swine fever with DNA-delivered gp55. Vaccine 18:1932-1938.

Beach NM, Ramamoorthy S, Opriessnig T, Wu SQ, Meng XJ. 2010. Novel chimeric porcine circovirus (PCV) with the capsid gene of the emerging PCV2b subtype cloned in the genomic backbone of the non-pathogenic PCV1 is attenuated in vivo and induces protective and cross-protective immunity against PCV2b and PCV2a subtypes in pigs. Vaccine 29:221-232.