製備簡易的幾丁聚糖固定在磁性奈米粒子作為磷酸化胜肽選擇性萃取

Facile Preparation of Chitosan-Immobilized Magnetic Nanoparticles for Selective Enrichment of Phosphorylated Peptides

蔡朋璇(Peng-Hsuan Tsai)

指導教授 ： 吳志哲

國立暨南國際大學/科技學院/應用化學系/碩士(2013年)

摘要

磷酸化蛋白質是蛋白質體學上一個很重要的後轉譯修飾(posttranslational odifications)，可藉由質譜來偵測到我們所需要的資訊。一般來說在質譜上的離子化效應會抑制所偵測到的訊號強度，所以使用與生物親和性的粒子來萃取磷酸化胜肽用在質譜上的分析是很重要的前處理。
本篇論文利用磁性奈米碳包鐵(Fe@C)當作基材固定幾丁聚醣來進行親和性來萃取純化磷酸化胜肽，運用在質譜分析。為了證明用磁性奈米粒子結合幾丁聚醣去做磷酸化胜肽萃取純化這個方法的可行性，我們利用消化過後的β-酪蛋白和BSA牛血清蛋白兩者混和後的蛋白質和消化後牛奶的蛋白質再經由粒子萃取，此方法對磷酸化胜肽有很高的專一性，在萃取已經過消化過後的蛋白質(Protein)，用含有磷酸的胜肽(β-酪蛋白)與非磷酸胜肽牛血清蛋白(BSA)，其比例達到1:1000，之後會純化出只有磷酸根的胜肽。我們還選用消化後低脂牛奶增加樣品的複雜度，結果可以鑑定出牛奶裡的磷酸化蛋白質，由此證明這方法對磷酸化蛋白質的選擇性是非常的不錯。
此奈米碳包鐵粒子結合幾丁聚醣的構想提供了簡單、有效、快速萃取的方法用來分離磷酸胜肽之後進入MALDI-TOF MS去做分析，並能原始的物質中得到的許多訊息。

關鍵字

幾丁聚醣 ； 磁性奈米碳包鐵 ； 磷酸化蛋白質 ； 質譜儀

並列摘要

A facile and effective approach to synthesize chitosan-immobilized magnetic nanoparticles was proposed using carbon-encapsulated iron nanoparticles (Fe@CNPs) as the magnetic core.Poly(acrylic acid)-coated Fe@CNPs were prepared by free radical polymerization of acrylic acid and used as magnetic substrates for subsequent Chitosan immobilization.The chitosan-immobilized magnetic probes were applied for rapid and selective identification of phosphopeptides from complex peptide mixtures by MALDI-TOF MS.

並列關鍵字

chitosan ； magnetic nano-carbon-coated iron ； phosphorylated proteins ； mass spectrometry

參考文獻

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