Monitoring a Toluene Degrading Bacteria (Pseudomonas putida D8) in Soil, with and without Toluene Amendment, via PCR-ELISA

利用PCR-ELISA來探討添加甲苯對甲苯降解菌(Pseudomonas putida D8)在土壤中消長之影響

熊耀筠(Lau-Lun Shiung) ； 趙維良(Wei-Liang Chao)

《臺灣農業化學與食品科學》 43卷2期 (2005/04) Pp. 149-155

https://doi.org/10.6578/TJACFS.2005.020

摘要

本篇研究主要探討甲苯的添加對Pseudomonas putida D8（甲苯降解菌）在土壤中宿命之影響，利用一組針對todC1部分基因(560 bp)爲目標之引子(todC1F與todC1R)來進行Pseudomonas putida D8之偵測。以12株土壤常見細菌與六株腸道菌的genomic DNA爲模版，根據聚合酶鏈鎖反應與南方雜合反應（以上述todC1部分基因爲探針）之結果，顯示此組引子具極佳之專一性。先使用PCR-ELISA技術建立菌數與DNA濃度之標準曲線，獲得下列線性關係公式y=0.0005x+0.1512; r^2=0.9832，其適用範圍爲每克土壤（或每毫升）10^4－5×10^5個菌體。根據傳統之平板培養法，利用toluic acid爲唯一碳源之選擇培養基，偵測Pseudomonas putida D8在土壤中之消長情形，結果顯示在有添加甲苯之狀況下到188小時後方才無法測得目標菌株；反之，在沒有添加甲苯的情況下，48小時後便已無法測得。若是利用PCR-ELISA進行菌數變化之偵測，則不論有無添加甲苯，其菌數均在每克土壤10^5-10^6之間。顯然，PCR-ELISA可避免傳統以平板培養基進行菌數計數時所遭遇之活而不長(VBNC)的問題，並且能更有效的去偵測Pseudomonas putida D8在土壤中之宿命。

關鍵字

PCR-ELISA ； 甲苯 ； Pseudomonas putida ； 消長 ； 土壤

並列摘要

無資料

並列關鍵字

PCR-ELISA ； Toluene ； Pseudomonas putida ； Survival ； Soil