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  • 學位論文

利用基因重組之大腸桿菌生產盤尼西林醯化酶之研究

Penicillin Acylase Production by Recombinant E. coli

指導教授 : 劉懷勝

摘要


盤尼西林醯化酶(penicillin acylase)於製藥工業上常被利用來生產6-APA(6-amionpenicillanic acid)以製造半合成抗生素,而盤尼西林醯化酶是一種微生物酵素,故本研究是利用搖瓶培養基因重組之大腸桿菌HB101(pTrcKnPAC2902)生產盤尼西林醯化酶。實驗首先探討添加Glycerol、Leucine、Proline及Thiamine於培養基中之最適化濃度,接著利用相互混合添加及不同添加方式,尋求酵素產量最多之添加物及添加方式。 由實驗結果得知,個別添加Glycerol、Leucine、Proline及Thiamine之最適化濃度分別為2.5、0.25、0.2及0.003 g/L,其中又以添加Glycerol所生產之酵素為最多。接著利用Glycerol、Leucine、Proline及Thiamine相互混合添加,對於酵素產量並無加成性地增加,且所生產之酵素量皆不如單獨添加Glycerol多,而特別的是當同時添加Glycerol與Leucine時,對於菌體生長及酵素生產皆明顯受到抑制,因此便利用(1)將Leucine延後至Glycerol耗盡時(24 hr)添加。(2)培養至24 hr時,添加NaOH使培養基中的pH產生先降後升之現象。此兩個方法皆對於菌體生長及酵素生產有所改善,又以後者較佳。 除此之外,亦利用Glycerol進行不同添加方式之實驗,其酵素產量皆少於初始培養即加入Glycerol之方式。而由諸多實驗中吾提出一假設:菌體將Glycerol代謝成未知成分X (pH下降),過程中主要弁酮偯飢U生長;待Glycerol耗盡,未知成分X即又被代謝成另一未知成分Y (pH上升),此過程中則主要助益酵素生成,而此假設也隨後於利用不同添加量的醱酵液(不同培養時間)之實驗中獲得證實。

關鍵字

甘油 脯胺酸 白胺酸 硫胺素

並列摘要


無資料

並列關鍵字

Thiamine Proline Glycerol Leucine

參考文獻


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被引用紀錄


陳柏誠(2010)。以藥物分子為模板製備電化學感測器及其分子辨識之研究〔碩士論文,國立虎尾科技大學〕。華藝線上圖書館。https://www.airitilibrary.com/Article/Detail?DocID=U0028-2207201015280800

延伸閱讀