無論在工業上或學術研究上,對於蛋白質復性程序中,如何在高濃度蛋白質下,提高復性產率為主要課題。直接稀釋法為最簡便之復性方法,而藉由氧化還原對濃度的改變、添加劑的加入以及物理方法上的應用皆有效的提升蛋白質復性效果。 本研究針對復性緩衝液中還原態穀胱甘肽(reduced glutathione,GSH)濃度變化作分析,探討不同操作條件下所造成的影響,最後將所得濃度變化以動力學分析,期望得到一合適之反應方程式。同時將復性緩衝液隨時間放置,測量其對活性回收率之影響,討論氧化還原對(GSH/GSSG)濃度及比例在復性程序中的效果。我們使用高效能液相層析儀 (HPLC)將GSH濃度變化作分析,結果顯示在高溫環境下(50℃∼90℃),GSH於反應後期均會產生副產物,而在低溫環境下(20℃∼40℃),GSH則隨時間氧化成GSSG。利用動力學分析不添加EDTA時,GSH氧化速率為一0.5級反應;而添加EDTA則有效的延遲其氧化速率,為一1 級反應。在溶菌酶復性過程中,復性緩衝液隨時間放置,由於GSH氧化形成GSSG,復性效果亦隨時間增加。將GSSG濃度變化對活性回收率做圖以及GSSG/GSH比例對活性回收率做圖比較下可發現,GSSG濃度與活性回收率之間有正相關;而GSSG/GSH並非影響復性效果之絕對因素。且在GSSG濃度達1.2mM 以上時,有最好的活性回收率。