碳六十固定化免疫蛋白質石英壓電感測器的研製與應用

Preparation and Application of Fullerene C60 Immobilized Protein Piezoelectric Bio-Immunosensor

廖窈萱

指導教授 ： 施正雄

國立臺灣師範大學/理學院/化學系/碩士(2003年)

摘要

摘要
本研究在研製一抗體的壓電晶體感測器，以塗佈C60的石英壓電晶片來研究C60與肌紅蛋白（myoglobin）間的反應。結果C60與肌紅蛋白間為不可逆的化學吸附，進一步將肌紅蛋白與C60置於反應瓶中二天，發現褐色生成物，以IR光譜做鑑定，經過光譜比對，得知產物是由C60與肌紅蛋白結合而成。亦探討石英晶片上的C60/PVC塗佈量、肌紅蛋白濃度對C60－肌紅蛋白吸附量的影響。
以塗佈固定化C60/肌紅蛋白的石英晶片偵測肌紅蛋白抗體，可得到頻率下降的訊號變化，且是可逆的物理性吸附。利用此現象，可研究肌紅蛋白－肌紅蛋白抗體的反應條件，發現反應會受濃度、pH值、溫度的影響，由結果顯示，其最適的條件為：pH值約為7、溫度約為22 ℃，偵測下限為4.36μg。此晶片可以重複使用7次，儲存在水中，置於冰水用存的環境下（約1℃），保存九天後仍然還有約90 ﹪的活性。
探討各種干擾物對肌紅蛋白－肌紅蛋白抗體結合的影響，發現：血液中的干擾物對此反應的影響不大，選擇性係數皆接近1；10-5M重金屬陽離子中，Zn2+、Cu2+稍有影響，而Pb2+影響很大；10-4M有機物，隨著官能基的不同影響由大至小為：胺＞酸＞醇＞醛酮。
研製另一C60/血紅蛋白（C60－Hemoglobin）塗佈石英壓電晶體感測器。首先發現C60－血紅蛋白間為化學性吸附，針對此現象做C60塗佈量、血紅蛋白濃度的影響。以此固定化C60/血紅蛋白的石英壓電晶片偵測血紅蛋白抗體，偵測下限可至3.23μg/mL，再觀察pH值、溫度、血液中干擾物對血紅蛋白－血紅蛋白抗體的影響，結果為：最適結合的條件在pH約為7，溫度在27 ℃，而血液中的干擾物對此反應的影響則非常小。此C60/血紅蛋白晶片可重複使用6次，儲存在4℃水中，可保持幾乎100 ﹪活性至七天。
在本研究中，固定化C60－麥膠蛋白（C60－gliadin）亦被合成並做為壓電石英晶片上之塗佈物。已研製好的C60/麥膠蛋白石英壓電晶體來偵測麥膠蛋白抗體，其偵測下限為1.98μg/mL。研究麥膠蛋白－麥膠蛋白抗體間結合的條件，在pH值約為7、溫度在34℃時反應最好。此晶片可重複使用6次，儲存在4℃水中，保存期限可至12天。

關鍵字

石英壓電感測器 ； 碳六十 ； 蛋白質 ； 抗體 ； 免疫反應 ； 肌紅蛋白 ； 血紅蛋白 ； 麥膠蛋白

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QCM ； Protein chip ； antibody ； immunoreaction