非水相毛細管電泳�77K低溫螢光光譜分析法對逆轉醇Resveratrol之分析研究

On-line Identification of Resveratrol by Nonaqueous Capillary Electrophoresis/Fluorescence spectroscopy at 77K

陳怡秀(Yi-Hsiu Chen)

指導教授 ： 林震煌

國立臺灣師範大學/理學院/化學系/碩士(2000年)

摘要

" Resveratrol "（3,5,4’-trihydroxystilbene）是一種黃酮類的抗氧化物，存在於許多的天然花果中，尤其以葡萄及紅酒中含量最多。它具有抗氧化的功能，可以有效防止人體機能老化、動脈粥狀硬化、心血管病變以及癌症的發生。市售的葡萄酒中內含的resveratrol有trans-及cis-兩種幾何異構物的存在，雖然所含的cis-resveratrol含量很少，但由於目前我們對cis-resveratrol相關的生物藥理活性仍不甚瞭解，因此有必要將此二種異構物分離。目前最常見的分離方法以HPLC為主，並輔以photodiode array來進行偵測及鑑定。但一般市售組裝的儀器大多只能量得室溫吸收光譜，而在室溫下吸收光譜譜峰又相當寬廣，若在複雜的基質中，難免混雜有相似吸收光譜的物質，造成譜峰判定上的困難。
為了能快速分離且正確判知resveratrol的異構物，本研究開發非水相毛細管電泳層析/超低溫螢光分析法，先以毛細管電泳法分離trans-及cis-resveratrol，當樣品電泳至偵測窗的瞬間冷凍至77 K，以便得到低溫螢光光譜，做為譜峰的確認及更精確的光譜比對。本研究更發現，非水相螢光偵測法比一般使用的水相緩衝溶液在進行分離時，可增強分析物的螢光強度並增加偵測的靈敏度。由實驗結果顯示，使用最佳化的分離條件50 mM SC（Sodium cholate），20 mM醋酸銨（Ammonium acetate），70%甲醇（Methanol），30%氰甲烷（Acetonitrile）的非水相緩衝溶液以及超低溫（77K）螢光法的量測，對於偵測極限有很大的助益，可提高大約150倍。應用於葡萄酒中，可偵測到trans-resveratrol約3.8 ppm的含量。
本研究還開發了零度（0 ℃）以下（subzero）的非水相毛細管電泳分離方式—冰溫分離法，將全長1/3的毛細管至於零下70度的乾冰槽中進行分離。實驗結果顯示，在低溫下分離不僅可增強分析物的螢光強度，相對於一般在室溫下進行的分離更可以提高電泳分離的解析度。結合冰溫分離及on-line螢光77 K光譜偵測法，不僅可以成功地將resveratrol異構物完全分離，更可以獲知個別異構物的77 K螢光光譜。輔以stilbene異構物的標準螢光光譜比對，更可以進一步確認本實驗量得resveratrol螢光光譜的正確性。

關鍵字

非水相毛細管電泳 ； 77K螢光偵測法 ； trans-及cis-逆轉醇

並列摘要

This work presents a novel method for the accurate determining trans- and cis-resveratrol (3,5,4'-trihydroxystilbene) by nonaqueous capillary electrophoresis/fluorescence spectroscopy at 77 K. The proposed method permits, not only the separation of resveratrol isomers, but also ensures that on-line spectra are readily distinguishable and unambiguously assigned. The experimental results also indicate that the effect of nonaqueous CE buffer and low-temperature technique increase the detection limit by more than 150-fold.

並列關鍵字

nonaqueous capillary electrophoresis ； 77K fluorescence spectroscopy ； trans- and cis-resveratrol

參考文獻

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