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植物保護學會會刊

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中華植物保護學會,刊名變更

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台灣地處亞熱帶,氣候相當適合瓜類栽種,瓜類作物遂成為台灣重要的經濟作物之一。我國每年瓜類作物的栽種面積大約有23,000公頃以上,主要栽培區域以台南市、嘉義縣、雲林縣為主。病害是瓜類作物生長的限制因子之一,其中包括病毒、細菌及真菌等所引起之病害。2009年在雲林地區發現大量瓜類作物出現黃化現象,經研究發現與2004年發生於日本的瓜類褪綠黃化病毒(Cucurbit chlorotic yellows virus, CCYV)所引起的病害相同,此病毒病害已造成瓜類作物嚴重危害。選殖CCYV病毒鞘蛋白(coat protein, CP)基因以供製造抗血清之用。根據選殖株pGEMT-CP/DH5α基因定序之結果得知鞘蛋白基因之核酸長度為735 bp,此基因轉譯成蛋白質時可產生245個胺基酸且其分子量為28 kDa。為大量生產鞘蛋白,將鞘蛋白基因重組至選殖株pQE31-CP/M15中,蛋白質表現分析證實此選殖株可在pQE系統中穩定表現,經大量純化後也成功製造出鞘蛋白之抗血清,可實際應用於CCYV之免疫磁珠檢測分析。

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番茄斑萎病毒屬("Tospovirus")隸屬於布尼亞病毒科("Bunyaviridae"),病毒顆粒呈球型具外套膜(envelope),其內含三條單股RNA片段,依大小稱之為L、M及S RNA,由薊馬類(thrips)昆蟲以永續性方式傳播,核鞘蛋白(nucleocapsid protein, NP)序列的同源性與血清學親緣關係,為該類病毒分類之重要依據。番茄斑點萎凋病毒("Tomato spotted wilt virus", TSWV)是"Tospovirus"屬的代表種(type species),寄主範圍廣,且在全世界造成嚴重的危害,在台灣亦有危害甜椒及彩色海芋等作物的記錄。為了落實防檢疫工作,本研究以細菌表現系統生產TSWV之NP做為抗原,用以製備抗血清,命名為RAs-TSWV-NP。經間接酵素連結免疫吸附分析法(indirect enzyme-linked immunosorbent assay, indirect ELISA)與西方墨點轉漬法(western blotting)分析RAs-TSWV-NP和16種tospoviruses之反應,可得知 RAs-TSWV-NP除了與TSWV反應外,亦與花生輪斑病毒("Groundnut ringspot virus", GRSV)、番茄黃化斑點病毒("Tomato chlorotic spot virus", TCSV)、水仙百合壞疽條斑病毒(Alstroemeria necrotic streak virus, ANSV)、菊花莖部壞疽病毒(Chrysanthemum stem necrosis virus, CSNV)、以及鳳仙花壞疽斑點病毒("Impatiens necrotic spot virus", INSV)產生血清反應。親緣演化分析顯示TSWV、GRSV、TCSV、ANSV、CSNV及INSV屬於同一演化分支(clade)。關於TSWV、GRSV、TCSV和ANSV之間的血清學關係雖早已於先前的文獻中報導,然而本研究結果更進一步指出TSWV與CSNV及INSV之間亦可能存在著血清學親緣關係,此結果與親緣演化分析符合。親緣關係的釐清將有助於"Tospovirus"屬病毒的診斷與鑑定。