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Population Genetics Analysis of Zacco in Taiwan: An Application of Amplified Fragment Length Polymorphisms

台灣溪哥分爲粗首鱲和平頷鱲兩種，過去研究顯示種內的族群分化與地理分部有關。AFLP是一種選擇性擴增生物基因組DNA限制性片段的方法，此分子遺傳技術方便迅速又可靠，可以精確地提供族群遺傳特性或個體之間的差異性，是釐清台灣溪哥族群結構的絕佳研究方法。使用EcoRI與MseI作爲內切酶，分析總共83個溪哥個體之基因組，選用片段長度40~239bp之AFLP多型性片段共200個，作爲重建台灣溪哥親緣關係樹之基礎資料。以Nei-Li distance tree分析，結果發現粗首鱲（包括NA&SA兩型）、平頷鱲台灣型(TL)和平頷鱲日本型(JL)明顯被分爲三大群，顯示三者之間的族群遺傳結構有明顯的分化。此外，粗首鱲NA與SA之間亦有部份的分化情形。

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Comparison of Luciferase-based Dioxin Detection System Using Fish and Mammalian Cells

本實驗欲利用花身雞魚的鰭細胞(JF cell)，建立改良式的生物細胞戴奧辛偵測系統，達到低成本、高度敏感且可同時篩檢大量樣本的目標。本實驗將已接上luciferase基因和戴奧辛反應因子的受器載體(receptorvector)轉殖入JF cell。經過戴奧辛樣本處理之後，偵測細胞中luciferase冷光酵素的含量，即可反映出受測樣本中戴奧辛的含量。然而，實驗結果顯示JF細胞對於戴奧辛的處理並沒有顯著的反應，似乎無法有效偵測樣品中戴奧辛的濃度；同時，細胞形態在處理前後也沒有顯著的改變。因此我們懷疑JF細胞的質體轉殖效率不甚理想，以致於無法勝任未來生物檢測方法的理想材料。

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The Role of Na(superscript +)/Ca(superscript 2+) Exchanger in Modulating Calcium Homeostasis in Bovine Chromaffin Cell

嗜鉻細胞受到乙醯膽鹼刺激時，造成鈉離子湧入，並開啓電位閘門通道。自電位閘門通道湧入的鈣離子，會引發CICR，造成細胞內鈣離子濃度大量上升，促進胞吐作用的進行。同時，自乙醯膽鹼受器湧入的鈉離子，會讓鈉鈣交換蛋白短暫地反轉，貢獻一部份的鈣離子湧入。我們發現用Thapsigargin排空內質網會降低鈉鈣交換蛋白反轉所引起的[Ca(上標 2+)]c上升。此外，處理Ryanodine受器抑制劑Ryanodine或IP3受器抑制劑2-APB也皆能減少[Ca(上標 2+)]c之上升量。若同時處理Ryanodine及2-APB，其結果與單獨處理2-APB無顯著差異。這些結果表示鈉鈣交換蛋白反轉的確能夠使內質網從Ryanodine受器與IP3受器釋放鈣離子，且IP3受器可能扮演調控Ryanodine受器開啓的角色。鈉鈣交換蛋白和Ryanodine受器、IP3受器之間的互動對細胞內鈣離子恆定有重要影響。

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The Medullary Connections of Laryngeal Vagal Neurons of NA in the Rat

本實驗主要目的在研究延腦nucleus tractus solitarius (NTS)中循環呼吸相關區域與nucleus ambiguous (NA)處之呼吸性迷走神經元間的關連性。分別利用biotin-conjugated dextran (BD)注入NTS循環呼吸相關區域之正向追蹤實驗(anterograde tracingex periment)，以及WGA-HRP注入迷走神經、喉部氣管肌肉或喉返神經(recurrent laryngeal nerve, RLN)之逆向追蹤實驗(retrograde tracing experiment)探討之。WGA-HRP逆向追蹤實驗的結果，發現迷走神經元主要分布於延腦之dorsal motor nucleus of the vagus (DMV)與NA區域，而控制喉部氣管肌肉或RLN中的迷走神經元則主要分布於NA區域。微量注射L-Glutamate(10mM)到obex附近NTS中，找到能引起血壓明顯下降、橫隔肌電圖(diaphragm EMG)受抑制之反應點後，再微量注射BD(20-40nl)到此反應點中。十天後，能在延腦NA區域中發現大量染有BD之神經末梢及終鈕之分布，範圍亦涵蓋HRP標定喉頭迷走神經元所分布之NA區域，顯見二者之間極可能有直接之聯結，但尚待同時進行正向及逆向追蹤實驗的直接證明。

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Analysis of the Large Intestine and Cecum Microflora in Wild House Mouse (Mus musculus castaneus)

目前細菌培養技術僅能培養出極少比例的細菌種，對於研究微生物的議題上造成了瓶頸。爲了能有效的研究微生物，微生物學者研發出許多不同種分析方式，而本研究所採用的T-RFLP分析方法不需培養細菌即可分析，是目前研究微生物相最有效率的方法之一。本研究結合了T-RFLP以及DNA定序兩種方法針對16S rDNA試圖分析小家鼠大腸及盲腸道內細菌相的組成，期望建立小家鼠腸胃道細菌相的完整相圖，往後對小家鼠族群分析及其腸胃道細菌共演化的研究將有很大的幫助，而且對人類的腸胃道菌相研究也有幫助。本研究結果顯示大腸盲腸兩者的菌相有明顯的不同。

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Growth and Behavioral Development in Captivity Gray Wolf (Canis lupus) New Borns

臺北市立動物園圈養的雌性灰狼，於2003年5月9日產下兩隻健康情況良好的幼狼。本研究即運用監視錄影設備，以24小時連續拍攝方式，記錄幼狼出生後6週內的行爲，以剖析其行爲發展及與母狼互動的模式。研究結果顯示，幼狼出生後每日的0700~1000 hr爲其吮乳的低峰期，而吮乳與肉食頻率呈互補狀態，此交錯會影響對幼狼在第23至33日的成長。幼狼每日休息的時間比例逐漸降低，在33日齡後漸趨穩定，介於30~40%之間；而個體互動的強度與行爲多樣性則明顯增加。推測上述行爲發展受個體牙齒、骨骼、消化系統發育程度所影響，從而亦與個體在狼群社會中的角色建構有密切關係。

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Cd(superscript 2+) and Zn(superscript 2+) Induce Autophagy in the Saccharomyces cerevisiae

一般認爲細胞自噬(autophagy)可選擇性去除或隔離受損的巨分子及胞器，甚至促成細胞死亡，來避免這些物質或細胞干擾正常生理功能。本實驗的目的在於探討鎘離子和鋅離子引發酵母菌細胞自噬的情形。經試驗得知，鎘與鋅的濃度分別在10μM與5mM對酵母菌的生長有抑制的現象，我們用西方氏轉漬法觀察發現，以重金屬處理的酵母菌的確誘發了更多細胞自噬蛋白質的產生，另外我們也使用干涉相位差顯微鏡觀察其外部型態與液泡內的物質，發現以重金屬處理的酵母菌液泡中有較明顯的顆粒分子，推測是受損的巨分子及粒線體等胞器。我們的研究結果顯示，重金屬對酵母菌細胞自噬的生理表現有密切關聯，未來對細胞自噬基因達成選擇性傳遞－細胞質至濾泡傳遞途徑(Cytoplasm-to-Vacuole Targeting pathway)的機制有進一步認識後，便有助於了解並解決重金屬對生物的毒害。

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Verification and Analysis of the Result of the Yeast Two Hybrid Screens for Rotini, a Drosophila Golgi Protein

新近發現的果蠅高基氏體蛋白rotini可經由細胞膜上的多醣蛋白HSPGs調控果蠅的形態基因。rotini基因是第一個被搜尋辨識出來，對於特殊母源效應是致死基因，且已有人支持它是體節極性基因(segment polarity gene)中的一個新成員。在rotini突變的果蠅品系中，其Hedgehog及HSPGs之抗體染色結果極具戲劇化地下降。rotini和人類的高基氏體蛋白GPP34系列同源，後者被報導和細胞內運輸有關。爲了暸解rotini的功能，我們進一步進行雙雜交搜尋，並得到27個可能的候選基因；經過確認與分析之後，發現有一個具v-SNARE活性者可提供我們對於rotini的功能有更進一步的認識。

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The Roles of Lysophospholipids in Modulating the Intracellular Calcium Concentration in Bovine Chromaffin Cell

Sphingosine-1-phosphate(S1P)和Lysophosphatidic acid (LPA)兩種水解磷酸酯在發炎反應時在血液中濃度會顯著上升，對血管新生與內皮細胞的分化、增生等皆扮演重要的角色。目前已知在神經細胞及神經膠細胞上，S1P和LPA都會造成細胞內鈣離子濃度上升，但其訊息傳導機制仍不清楚。在本實驗中發現，這兩種水解磷酸酯都可造成牛腎上腺髓質嗜鉻細胞[Ca(上標 2+)]i顯著上升，且劑量－反應關係有一飽和現象。此反應可被Thapsigargin抑制，顯示在S1P和LPA刺激下，細胞內鈣庫爲[Ca(上標 2+)]i上升的重要來源。爲進一步瞭解S1P和LPA的作用途徑，我們以各種藥物來處理細胞，以探討其作用機轉的差異。U73122和2-APB抑制兩者所造成的[Ca(上標 2+)]i上升，顯示Gq-PLC途徑的參與。而Pertussis toxin亦會抑制[Ca(上標 2+)]i上升，顯示Gi也參與反應。當以Ryanodine及DMS處理時，則只有S1P所引起的[Ca(上標 2+)]i上升受到明顯的抑制。這些結果顯示S1P和LPA主要都是經由活化Gq-PLC途徑，造成胞內鈣庫釋出鈣離子；而S1P還會間接活化ER上的Ryanodine受器，以釋出更多的鈣離子。

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A Novel Adenosine Receptor on Abalone (Haliotis diversicolor) Hemocytes

Dot blotting顯示九孔的血液細胞有似哺乳動物的Adenosine A1 receptor的存在，而在各種adenosine receptor agonist的測試中發現，adenosine A1 receptor agonist-CHA、R-PIA-會抑制細胞附著，使細胞內cAMP的合成受到抑制、PKA的活性降低，證實九孔血液細胞膜表面確實有具有功能的adenosine receptor存在，且功能跟細胞附著有關。又因non-selective adenosine receptor agonist-NECA、Adenosine-對細胞附著沒有顯著的影響，故推測可能有兩種以上的receptor存在。另一方面，在有caffeine存在的情況下，用adenosine A2A receptor agonist-CGS21680-處理細胞，對細胞附著有加成抑制作用。總結上述結果，九孔血液細胞中應該存在一種與目前已知在哺乳動物細胞不相同的adenosine receptor。