Chitosan打開細胞間Tight junction機制的探討

Mechanism of Chitosan Induced Tight Junction Opening

葉紫涵

指導教授 ： 宋信文

國立清華大學/工學院/化學工程學系/碩士(2010年)

摘要

幾丁聚醣(chitosan)因具有將上皮細胞間tight junction (TJ)打開的特性，而被應用於口服或鼻腔給藥的藥物吸收促進劑，然而幾丁聚醣打開細胞間TJ的詳細機制尚未清楚了解。因此本研究分為兩個方向進行探討：第一部分為幾丁聚醣與細胞膜蛋白間的作用，首先以抗體阻斷膜蛋白與幾丁聚醣間可能的結合後，加入幾丁聚醣，利用transepithelial electrical resistance (TEER)測量TJ打開的情形，結果顯示coxsackievirus and adnovirus receptor (CAR)被抗體阻斷後，會抑制幾丁聚醣打開TJ的能力，因此進一步利用shRNA抑制細胞中CAR的表現量，以確認CAR在幾丁聚醣打開TJ中所扮演的角色。第二部分為利用microarray篩選出經幾丁聚醣處理後細胞所產生的基因表現變化情形，然後以RT-PCR測定以幾丁聚醣處理不移除及移除使TJ回復的兩組細胞中六種基因的表現變化。結果顯示TJ穿膜蛋白claudin-4在幾丁聚醣移除後1小時，基因表現會增為原先的6倍，而蛋白質表現量也會在1~4小時有2倍的增加。而在幾丁聚醣打開TJ的過程中，也經由分離細胞質/膜蛋白及免疫螢光染色的方式發現，隨著幾丁聚醣處理的時間，細胞膜內的claudin-4會有梯度性的下降情形。本實驗初步驗證幾丁聚醣打開TJ及其移除後TJ的回復過程中，claudin-4的表現量會受到顯著的影響。

關鍵字

幾丁聚醣 ； Tight junction

參考文獻

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