利用表面電漿共振生物感測器定量分析細胞培養液中介白素-6

Quantification of Interleukin-6 in cell culture medium using surface plasmon resonance biosensors

周子翔(HASH(0x1c830320))

指導教授 ： 吳見明

國立清華大學/原子科學院/生醫工程與環境科學系/碩士(2008年)

https://doi.org/10.6843/NTHU.2008.00543

摘要

表面電漿共振生物感測器（surface plasmon resonance biosensors） 是藉由偵測晶片表面上折射率微小變化來分析生物分子間的交互作用。利用光學偵測的方法，使其具有不用對待測物進行標誌、高靈敏度和即時快速分析等優點，但受到非特異性結合的影響，表面電漿共振生物感測器較少被使用在偵測複合液體中的分析物。本篇論文目的即是藉由表面電漿共振生物感測器定量細胞所分泌的介白素-6（interleukin- 6, IL-6）。
本論文利用lipopolysaccharide (LPS)刺激細胞分泌IL-6，收集細胞培養液，使用Biacore 3000進行檢測。為了能夠分析出細胞培養液中的IL-6，需提高表面電漿共振生物感測器的特異性和靈敏度，將晶片表面以mercaptoundecanoic acid (MUA)和mercaptohexanol (MCH) 1：3修飾而成混合自組裝單層膜，降低蛋白質非特異性吸附在晶片上。為探討抗體在空間方向性對於偵測IL-6的影響，比較兩種不同固化抗體的方式：一種是抗體直接固化在晶片表面、另一種是抗體藉由親和力與固化在表面的protein G結合。實驗中使用三明治免疫反應的偵測方式，當IL-6與表面的抗體結合後，加入二級抗體放大偵測訊號。
在本實驗結果發現，protein G會與細胞培養液中fetal bovine serum產生非特異性結合，無法分析IL-6濃度。抗體固化在表面的偵測方式中，必須透過二級抗體增強訊號後，才可以定量細胞培養液中IL-6的含量。但由於本實驗中使用的二級抗體濃度較低，且反應時間較短，靈敏度只比未使用二級抗體的方式增加約3.8倍。

關鍵字

表面電漿共振 ； 介白素-6 ； 自組裝單層膜 ； 非特異性結合

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無資料

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