利用半合成感測器檢測蛋白酶之活性

Semisynthetic Sensor for the Detection of Proteolytic Activities

施柏銘

指導教授 ： 陳貴通

國立清華大學/理學院/化學系/碩士(2012年)

摘要

蛋白酶是一種酵素可以藉由水解的方式將蛋白和多肽鏈之肽鍵催化斷裂，它廣泛的涉入生物過程與牽涉許多疾病，所以偵測蛋白酶的活性對臨床診斷是非常重要。
　　近年來發展許多蛋白酶偵測器，例如：酵素連結免疫吸附分析法已經被用來偵測蛋白酶活性，此分析方法有一連串繁瑣的步驟。我們的感測器整合ELISA所有的元件，不需要任何沖洗和分離步驟便於實驗上的操作。商業用的蛋白酶活性分析法主要使用蛋白酶辨認之胺基酸序列結合螢光發光團，此系統將有些許的缺點：高背景訊號及螢光訊號不能放大造就偵測微量蛋白酶靈敏度差。
　　我們提出抑制劑調節酵素之活性的設計和應用於蛋白酶活性之偵測。利用抑制劑調節酵素的活性可使螢光訊號產生放大的效果。半合成感測器是使用有活性的酵素經由SNAP-tag技術標記上BG-Linker(C6)3-para SA抑制劑形成封閉系統，SNAP-tag的融合蛋白可以選擇性的標記上O6-苄基鳥嘌呤，酵素在封閉系統會失活，不能水解受質。當蛋白酶出現，感測器將會被水解產生兩個分裂的蛋白，酵素在開放系統將會活化水解受質產生螢光訊號，藉由偵測螢光訊號可得之蛋白酶的活性。

關鍵字

感測器 ； 蛋白酶

參考文獻

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