中山醫學大學醫學研究所學位論文
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研究目的：本研究目的在觀察對於原發性隅角開放性青光眼之病患，使用選擇性雷射小樑網整型術治療，對於眼壓降低的效果。 研究方法：本研究分析42個雙側原發性隅角開放性青光眼之病人，在不停用目前青光眼藥水的前提下，於2010年至2015年間其中一側眼接受180度或270度選擇性雷射小樑網整型術，另一側眼則沒有接受雷射治療。記錄並分析雷射前及雷射後兩周、一個月、三個月、六個月及十二個月雙眼之眼壓變化。 研究結果：雷射治療前，兩組眼睛 (有接受雷射及沒有接受雷射) 的眼壓並沒有差異。有接受雷射治療的眼睛在雷射後兩周眼壓有稍微上升但未達統計學差異；然而，在雷射治療後一個月、三個月、六個月、十二個月眼壓均較雷射前降低且達統計學差異。沒有接受雷射治療的眼睛之眼壓則在每個統計時間點均沒有差異。再比較兩組眼睛，發現有接受雷射治療的眼睛在雷射後一個月至一年間都比沒有接受雷射的眼睛有更低的眼壓。 結論：對於已使用藥物治療之原發性隅角開放性青光眼患者，使用選擇性雷射小樑網整型術可以更進一度降低眼壓，對於減緩青光眼惡化有其治療角色。雖然剛打完雷射會有短暫眼壓上升之現象，但通常會自行恢復。總結來說，對於隅角開放性青光眼患者，選擇性雷射小樑網整型術是一個安全且有效降低眼壓的新治療方法。
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根據流行病學研究說明，超重和肥胖與癌症風險增加有關。然而，肥胖到底是否會促進肝癌的發生仍屬未知。而桑葉萃取物(MLE)已被證實具有大量的抗氧化和抗發炎能力與改善肥胖之能力，但是MLE是否具有抑制肥胖促進肝癌發生之作用仍未被證實。在本研究中，Sprague Dawley (SD)大鼠以高油脂飼料誘導肥胖，並以含有0.01%的化學致癌物質diethylnitrosamine (DEN)飲用水連續餵食 12週後，誘導大鼠自發性產生肝癌。正如預期，HFD確實增加大鼠的體重與肝臟重量，且大鼠肝臟中的三酸甘油酯(TG)和肝臟中膽固醇的含量也有明顯的上升，相同的趨勢也出現在血液中的三酸甘油酯，總膽固醇和肝臟脂肪變性程度中。重要的是，肥胖確實會增加DEN所誘導肝癌腫瘤的數目，大小以及肝癌發病率。從結果中可以觀察到，MLE可以改善血液中的肝功能指標酵素如ALT，AST，γ-GT與AFP。 MLE還能夠加強大鼠肝臟中的解毒酵素和抗氧化酶的活性。根據上述的結果說明，肥胖確實會增強DEN誘發肝癌的發生，而MLE則具有抑制肝癌發生之能力。這些研究成果未來將有助於肝癌病患達到預防保健的功效。
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癌症預防為現代醫學預防之重要任務，亦是世界趨勢，因此尋找一些天然的預防物質為當今預防醫學的重要工作。有許多研究報告證實荷葉具有抗氧化活性、降血脂、減輕體重增加及減少發炎反應等作用，因此本實驗進一步評估荷葉是否具有抗癌方面之功效。本研究利用化學致癌物質乙醯胺基芴 (2-acetaminofluorene, AAF)誘導大鼠自發性產生肝癌的模式，評估台灣荷葉抑制大鼠肝癌之作用，並探討其中的相關機轉變化。在AAF動物模式之結果中發現，台灣荷葉可以減緩AAF誘導之肝癌發生與進展，而從其肝臟外觀、重量、切片與血清生化結果顯示，AAF成功誘導大鼠自發性發生肝癌，並且台灣荷葉有效地減緩肝癌的生成作用。台灣荷葉是透過增加肝臟之解毒功能，與增加肝臟的抗氧化能力，進而達到保護肝臟，抑制肝癌的發生。綜合以上結果說明台灣荷葉萃取物能夠透過增加抗氧化酵素活性、加強解毒酵素作用及減少發炎反應，達到改善血脂肪，減緩肝功能指標的上升，保護肝臟作用，進一步抑制肝癌的發生率。本研究成果可應用於健康食品之發展，減少肝癌之發生，以達預防醫學抗癌之作用。
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現行流行病學研究統計指出，多種危險因子與第二型糖尿病的發病有關，其中肥胖是一項最常見的因素，並且伴隨著代謝症候群的發生。根據實驗室之前的研究，龍鬚菜水萃物(water extracts of Sechium edule shoots, SWE)可以有效抑制油酸所誘導肝臟脂肪合成和脂肪分解增加。因此，本研究的目的是探討SWE對高油脂飲食（High fat diet, HFD）配合低劑量Streptozotocin (STZ)所誘發出的高血脂高血糖的糖尿病大鼠的抑制作用。將大鼠隨機分為4組：control組、HFD + STZ組、HFD + STZ + SWE0.5％組、HFD + STZ + SWE1.0％組。確認施打STZ之組別其血糖> 200 mg/dl後，即可開始加藥進行八週的試驗，於犧牲後將血清和組織進行分析。結果發現SWE0.5%及1.0%組的血糖有明顯比HFD + STZ組下降約20%。然而，血清中三酸甘油酯和及總膽固醇表現量並無受顯著影響。從組織切片做觀察，利用Hematoxylin-Eosin stain (H E stain)及油紅(Oil red O stain)染色分析，從加藥組與誘導組做比較，觀察到餵食SWE可明顯改善肝臟中脂肪泡的堆積。另外，腎臟組織利用H E、Periodic Acid-Schiff stain和Masson氏染色分析，結果表明，SWE亦可以避免由高血糖所引起的腎間質增生、醣質推積以及膠原蛋白增生。整體而言，本篇實驗證明在由高油脂飲食誘發之第二型糖尿病大鼠模式上，透過龍鬚菜萃取物的添加，可以穩定血液中葡萄糖的表現量，亦可以減緩高血糖所引起的副病變傷害，未來對於在代謝症候群的治療上亦有很大的幫助。
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ZAK 是一種 mixde lineage kinase-like protein ，歸類於MAP kinase kinase kinase ( MAP3K ) family 中的 MLK subfamily ，由 800 個胺基酸構成，分子量約為91 KDa。從過去的文獻中得知，在不同的細胞中，ZAK的過度表現會造成不同的現象，在肝癌細胞會促進細胞凋亡，在皮膚癌細胞會促進細胞增生及轉型，在心臟肌母細胞會增加細胞大小導致心肌肥大，在大腸癌細胞會促進細胞爬行能力，而在肺癌細胞則會抑制細胞的生長、群落形成及腫瘤大小。ZAK包含三個功能性片段，分別為 kinase catalytic domain (KD) ， leucine zipper ( LZ ) 及 sterile α motif ( SAM )，因此我們將探討ZAK的三個功能片段對於肺癌細胞生長及轉移的影響，我們將全長ZAK及不同ZAK基因片段( ZAKdn、△LZ、△SAM、△LS )轉染到H460及H1299肺癌細胞，並觀察其對於生長、爬行及轉移的影響。我們發現，過度表現ZAK及不同ZAK基因片段不論在H460或H1299肺癌細胞的生長、爬行及轉移實驗中均具有抑制能力，而同時剔除 LZ 及 SAM ( △LS )後對於生長或轉移依然具有抑制的功能，尤其在H1299肺癌細胞， LZ 的功能推測與抑制轉移相關，而失去 SAM 的片段在每個結果都不影響ZAK的抑制能力。
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研究目的：此研究的目的是希望能釐清關於原因不明不孕症男性病患使用密度梯度離心方法進行試管嬰兒療程精蟲製備時，其體內全身性以及局部性抗氧化狀態對其精蟲所造成的影響。我們也將探討這類病患其全身性與精液中抗氧化狀態與其接受試管嬰兒療程之成功受精率和胚胎發育間的相關性。 研究方法及資料： 共有60對接受試管嬰兒療程的原因不明不孕症病患參與我們的研究，我們使用這60位男性病患的皮膚類胡蘿蔔素狀態和精漿中的總抗氧化能力來分別代表其全身性和局部性抗氧化狀態的生物指標。我們使用密度梯度離心的方法來進行在試管嬰兒療程中的精蟲準備。 研究結果： 我們的研究結果顯示，使用密度梯度離心的方法來進行精蟲準備，會增加精蟲的活性氧化物，但是不會對精蟲產生氧化傷害。同時，皮膚類胡蘿蔔素狀態和精漿中的總抗氧化能力都與其接受試管嬰兒療程之成功受精率和良好的胚胎發育呈正相關性。 結論與建議： 原因不明不孕症男性病患的全身性類胡蘿蔔素狀態與精漿中的總抗氧化能力，兩者均與其接受試管嬰兒療程之成功受精率和良好的胚胎發育有密切的正相關性。這結果暗示了這一類的病人如果補充全身性口服的抗氧化劑或增加精漿中的抗氧化物的量，可能會對其精蟲的功能有所助益。我們的研究對於這一類患者的氧化壓力所扮演的角色提供了更多的證據，並且提供原因不明不孕症病患另一種治療的選擇。
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惡性腫瘤在最近幾年一直位居國人十大死因的第一名，其中口腔癌(Oral cancer)，又位居十大死亡癌症中的第五名，其嚴重性不可輕忽。而癌症會造成病患死亡主要的原因，是因為其具有遠端轉移(Metastasis)的特性，因此阻斷癌細胞移動的能力，是癌轉移研究的主要目標。癌轉移是個複雜的過程，需要多種因子參與調控，近年來在許多研究中證實了Matrix metalloproteinases (MMPs)參與調控癌細胞的轉移。本篇研究所使用的中草藥墨旱蓮萃取物(Eclipta prostrate extract, EPE)，在以往文獻中發現具有抑制肝癌、乳癌及肺癌癌細胞轉移和血管新生(Angiogenesis)的能力，但是對於口腔癌的影響並不清楚。於是本研究使用口腔癌細胞株SCC9來探討，墨旱蓮是否能抑制SCC9細胞株的轉移，以及對MMP-2具有何種影響。首先以MTT assay，得知墨旱蓮萃取物濃度0-100 μg/ml的劑量下，不影響SCC9細胞株細胞存活率，接著以Wound healing及Boyden chamber assay觀察墨旱蓮是否會影響SCC9的移動能力，結果發現，隨著藥物濃度的增加，細胞的移動能力逐漸被抑制，再來以Gelatin zymography及Western blot觀察墨旱蓮對口腔癌細胞株SCC9的MMP-2活性和蛋白表現有何影響，從結果觀察到，墨旱蓮確實會抑制MMP-2的酵素活性及蛋白表現；接著，觀察墨旱蓮對訊息傳遞路徑的影響，發現墨旱蓮抑制了ERK的磷酸化表現；最後利用ERK抑制劑確認墨旱蓮能透過訊息傳遞路徑ERK來調控下游蛋白表現，從以上實驗觀察到的現象，推論墨旱蓮可經由抑制ERK的磷酸化，降低MMP-2的表現，達到抑制口腔癌細胞SCC9的移動能力。
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研究背景： 肺炎黴漿菌曾經被研究與氣喘的發生和持續相關。然而我們並不清楚對於台灣的兒童，感染黴漿菌肺炎是否影響日後氣喘的發生。 研究方法： 本研究從全民健康保險研究資料庫找出2003年到 2011年間新診斷為肺炎黴漿菌感染的兒童。在診斷肺炎黴漿菌感染之前即被診斷為氣喘的病人即被排除。肺炎黴漿菌感染的病童依年紀被分成三個族群(0-2歲，3-5歲及6-18歲)，我們依據出生年、性別及診斷肺炎黴漿菌感染的日期，從普通人口找出13284位沒有被診斷為肺炎黴漿菌感染的兒童來當對照組。有肺炎黴漿菌感染的兒童被追蹤至2011年底。我們用Cox競爭風險模式來計算感染肺炎黴漿菌在三個不同年齡層評估氣喘風險的風險比值。 研究結果： 排除共病的影響。在每個年齡層，感染肺炎黴漿菌的病人跟那些非肺炎黴漿菌感染的病人，有較高的氣喘發生率。和沒有感染肺炎黴漿菌的族群相較，有感染肺炎黴漿菌這個族群發生氣喘的風險比值在0-2歲、3-5歲及6-18歲分別是1.44﹝95%信賴區間為1.09-1.90﹞，2.19﹝95%信賴區間為1.82-2.63﹞及2.75﹝95%信賴區間為1.88-4.03﹞ 結論與建議： 感染肺炎黴漿菌跟增加兒童氣喘的發生率相關，特別是6-18歲這個族群。
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已知胰島素訊息缺損和糖尿病與老化相關疾病之間有緊密關聯性，如血管疾病、阿茲海默症和非酒精性脂肪肝等，本研究證實老化相關疾病和神經退化性疾病的致病機轉確實與胰島素訊息有相關聯。第一部分研究證實在SK-N-MC神經細胞中如腐植酸血管疾病因子的存在會加重乙型類澱粉(β-Amyloid, Aβ)所誘發的神經毒性，其機制主要透過刺激PERK和Eukaryotic Initiation Factor 2 α (eIF2α) 的磷酸化活化內質網壓力。研究結果也發現Aβ誘發的氧化壓力(oxidative stress)和粒線體功能失調主要因為減少Silent information regulator-mammalian ortholog 1 (Sirt1)/peroxisome proliferators-activated receptor γ co-activator 1α (PGC-1α)的表現，導致神經細胞加速凋亡。然而，在腐植酸和Aβ共同處理情況下，若外加內質網壓力抑制劑salubrinal (eIF2α inhibitor)或Sirt1過量表現則顯著地恢復細胞存活率。研究推論血管性疾病如腐植酸可以透過活化內質網壓力和氧化傷害而加重Aβ誘導的神經細胞毒性，此結果提供一個新的解釋在血管疾病誘發阿茲海默症的致病機轉。第二部分證實一個特別的microRNA miR-302沉默phosphatase and tensin homolog (PTEN)基因而活化Akt的表現，隨後刺激Nanog的表現，進而抑制Aβ誘發的pSer307 insulin receptor substrate 1 (IRS-1) 表現，並增加IRS在 tyrosine 的磷酸化和活化pSer 473-Akt/pSer 9-glycogen synthase kinase 3β (GSK3β) 。此外也發現miR-302可經由調控Akt路徑進而刺激nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2)/heme oxygenase-1 (HO-1)的表現，最後抑制Aβ誘發的氧化傷害。更進一步還在人體實驗研究阿茲海默症病人的peripheral blood mononuclear cell (PBMC)中Nanog和La ribonucleoprotein domain family member 7 (LARP7)的mRNA表現，阿茲海默症病人皆顯著地減少Nanog和LARP7的mRNA的表現，本研究認為以上結果在未來可有助於開發新的診斷方法。第三部分則說明在非酒精性脂肪肝疾病中，miR-302如何減少肝臟脂肪酸的合成和減緩肝臟胰島素阻抗的一個可能機制。結果發現miR-302透過沉默超長鏈脂肪酸延伸酶(elongation of very long chain fatty acids protein 6, Elovl6)，其功能為延伸C16到C18的酵素，減少高脂肪酸誘導的脂肪堆積、氧化傷害和肝臟胰島素阻抗等現象。綜合以上的研究結果證實氧化壓力似乎與老化相關疾病，如血管性疾病、阿茲海默症和非酒精性脂肪肝等疾病中扮演著重要的致病危險因子。而本研究發現透過減少氧化傷害或保護胰島素訊息路徑可以做為保護老化相關的致病機制，希望經由發現這些機制在未來對於這些疾病的預防與治療上能有所貢獻。
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研究目的： 本研究分成兩部分，第一部份比較第一型雙極性疾病患者與正常對照組的白血球粒線體DNA的拷貝數，單核苷酸多型性和氧化傷害的變化。第二部分則比較重鬱症病患與正常對照組的不同。 研究方法及資料：研究方法為個案對照研究，個案組來自中部某醫學中心精神科門診病患，符合DSM-IV精神科診斷手冊第一型雙極性疾患和重鬱症的診斷。納入條件為病情穩定而且在過去兩個月皆未改變精神科用藥。排除條件為藥物導致的精神病，飲食疾患，焦慮症或非法藥物濫用者。個案組與對照組皆無慢性身體疾病，無急性感染，且無懷孕。對照組來自身體健康的體檢個案，過去未有重大精神疾患，並且無抽菸。藉著周邊白血球分析，比較個案組與對照組的粒線體DNA的拷貝數，單核苷酸多型性和氧化傷害的變化。 研究結果： 本研究共招募四十名雙極性疾病患者，四十名重鬱症病患和七十名健康對照組患者。他們的年齡中位數分別是41.5, 42 and 38 歲。雙極性疾患和重鬱症患者的白血球粒線體DNA的拷貝數明顯比對照組患者要低 (p<0.001 and p=0.037)。 雙極性疾患和重鬱症患者都比對照組患者有較高的氧化傷害 (p<0.001)。病人組和健康對照組的C5178A和A10398G粒線體單核苷酸多型性比較並無差異。經廣義線性模型控制相關變項後，雙極性疾患和重鬱症患者的白血球粒線體DNA的拷貝數仍比對照組患者明顯降低。另外，粒線體DNA的氧化傷害與年齡成正相關。重鬱症患者的粒線體DNA的拷貝數與抗精病藥物使用呈負相關(p=0.036)。 結論與建議： 氧化傷害和粒線體功能異常可能與雙極性疾病，重鬱症的病理生理學有關連，這需要更大規模的研究證實。未來研究情感性疾患的粒線體功能異常也許可發展為生物指標。本研究之限制為橫斷面研究，僅為相關性探討，缺乏縱貫面追蹤，無法作為因果歸因；另外本研究病患病況穩定，所以本研究結果運用到其他族群需要留意。