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一種葡萄風信子病毒之鑑定及其血清與分子檢測工具之製備

具輕微黃化嵌紋病徵之進口葡葡風信子罹病組織粗汁液可與Potyvirus屬病毒專一性單株抗體產生正反應。進一步萃取葡葡風信子罹病組織之全量核酸，利用Potyvirus屬之廣效性引子對HRP 5/Oligo-dT進行反轉錄－聚合酶鏈鎖反應(Reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)，可增幅出一與預估相符合的核酸片段（約1.2 kb）。此RT-PCR產物經選殖及定序後，獲得一核酸Ma2選殖株。Ma2選殖株之核苷酸與胺基酸序列與Potyvirus屬的葡萄風信子嵌紋病毒（Muscari mosaic virus，簡稱MMV，序號EU042752）的鞘蛋白基之核苷酸和胺基酸序列皆有高於98%之相同度，顯示此葡萄風信子病毒爲MMV之一分離株(isolate)。進一步將Ma2選殖株之全長度鞘蛋白序列選殖於表現載體pET28b(+)上，轉型於E. coli Rosetta(DE3)宿主內並大量誘導其表現蛋白，分子量估計約29.7 kDa。經免疫分析證實此表現蛋白可與市售之Potyvirus專一性抗體反應，且將此表現蛋白經兔免疫注射後，得到對應Ma2鞘蛋白抗原之抗血清(As-Ma2)。As-Ma2抗血清可應用於酵素連結免疫吸附分析法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)、西方轉漬法(western blotting)，及SDS免疫擴散反應(sodium dodecyl sulfate immunodiffusion)與同源抗原產生反應，也於ELISA反應中與其他數種potyviruses之病葉組織有正反應之結果，進一步以西方轉漬法證明As-Ma2抗血清與四種豆類病毒(BCMV、BICMV、BYMV及SMV)、兩種天鵝絨病毒（OrMV及PtVY）、兩種瓜類病毒（MVbMV及ZYMV）以及一種茄科病毒PVMV等之鞘蛋白分子量相關位置有免疫反應，顯示As-Ma2於血清反應中可廣效應用於此等potyviruses的血清檢定。利用Ma2已知序列所設計之Maup/Madw引子對，於RT-PCR反應中可於葡萄風信子罹病組織中專一性地檢測出病毒反應，但不與其他種potyviruses罹病組織有反應，此引子對可應用於MMV之專一性檢測。國外已記錄之MMV首見見於台灣，本研究針對MMV病毒之檢測試劑進行開發，對於進口葡萄風信子種球之病毒監測具有實質之助益。

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農藥合理應用與蟲害管理

農藥是蟲害管理不可缺之重要利器，要如何合理的應用仍大家所關心，概略可分爲農藥的製造與生產、農藥的販售與管理、農藥的使用者與施藥管理、農藥指導者及媒體宣導等方面之配合。蟲害管理則可從認識害蟲及管理策略著手。植物醫生屬非常專業之工作，植物醫師應具備蟲害管理之基本要求，包括害蟲診斷、對症下藥及防治策略之選擇。植物醫師之培訓包括基本訓練及臨床訓練。應整合植物保護界、農藥界、農業界與學術界退休之人力，將經驗傳承給植物醫生，以提升臨床的經驗。建議植物醫師應分級且設置獎勵辦法，有機會應赴國外研習或觀摩，以利層次的提升及技術之改善，期早日達到健康、效率、永續經營的目標。