探討微圖案培養時細胞聚集之成因，以及結合微接觸壓印與模板侷限收集分析皮質神經生長錐

陳仕達(Shih-Ta Chen)

指導教授 ： 張兗君

國立清華大學/生命科學院/分子醫學研究所/碩士(2007年)

https://doi.org/10.6843/NTHU.2007.00466

摘要

在進入蛋白質體學(proteomics)的現今世代，分離、收集、純化各種次細胞(subcellular)結構，進行次蛋白質體(subproteomcis)分析，早已經是科學家們專注的焦點。而本實驗室致力於神經科學的研究，結合微機電系統工程與神經細胞培養，發展以軟式微影(soft lithography)為基礎，製作細胞生長的微圖案，達到分離細胞體與神經纖維的目的，對於生長錐進行收集與生化分析。在研究中發現，以微接觸壓印製造微圖案培養的神經細胞，會產生異常的細胞聚集(aggregates)。細胞聚集具有種種異於一般單一神經細胞的性質，會妨礙到細胞在微圖案上的生長。藉由結合微接觸壓印和模板侷限製作微圖案，可成功地將神經細胞培養成細胞陣列，使其細胞體、神經纖維、以及生長錐(growth cones)各集中不同的區域，且避免細胞聚集的產生。再加上對準系統，我們可將生長錐引導至特定位置，收集生長錐的蛋白質，進行凝膠電泳分析。跟神經細胞的total cells lysate比較，發現蛋白質的組成不同。利用這套技術，可將神經細胞培養成特定的陣列，並且直接地大量收集各種次細胞構造，進行生化分析與蛋白質體學的研究。配合cell adhesion molecular (CAM)蛋白質，在未來可望能夠引導神經纖維發展成前突觸結構，能夠對突觸作蛋白質體的分析，對於突觸的形成與特性，能夠有更加深入的探討。

關鍵字

生長錐 ； 微機電系統 ； 神經 ； 次細胞 ； 微接觸壓印 ； 細胞聚集

並列摘要

無資料

並列關鍵字

growth cone ； MEMS ； neuron ； subcellular ； microcontact printing ； aggregate

參考文獻

Barnes AP, Lilley BN, Pan YA, Plummer LJ, Powell AW, Raines AN, Sanes JR, Polleux F (2007) LKB1 and SAD kinases define a pathway required for the polarization of cortical neurons. Cell 129:549-563.

Biederer T, Sara Y, Mozhayeva M, Atasoy D, Liu X, Kavalali ET, Sudhof TC (2002) SynCAM, a synaptic adhesion molecule that drives synapse assembly. Science 297:1525-1531.

Brewer GJ, Torricelli JR, Evege EK, Price PJ (1993) Optimized survival of hippocampal neurons in B27-supplemented Neurobasal, a new serum-free medium combination. J Neurosci Res 35:567-576.

Chang JC, Brewer GJ, Wheeler BC (2003) A modified microstamping technique enhances polylysine transfer and neuronal cell patterning. Biomaterials 24:2863-2870.

Chang WC, Keller CG, Sretavan DW (2006) Isolation of neuronal substructures and precise neural microdissection using a nanocutting device. J Neurosci Methods 152:83-90.